苦楝SRAP-PCR反应体系的建立及优化

• 作者: 刘明骞 廖柏勇 邓小梅 陈丽君 陈晓阳
• 来源期刊: 华南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 苦楝 SRAP-PCR 体系优化 正交试验设计
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 页码范围: 104-108
• 页数: 5页
• 分类号: S792.33
• 字数: 2672字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.2015.03.018

摘要

[目的]应用SRAP技术对苦楝Melia azedarach遗传多样性、种质资源鉴定等开展研究,对苦楝SRAP-PCR体系中的模板DNA、dNTPs、Mg2+、引物和Taq DNA聚合酶5个组分浓度进行优化,建立适合苦楝的SRAP-PCR反应体系.[方法]采用单因素试验对反应体系中的5个因素分别设置8个浓度梯度水平,确定浓度范围后进行L16(45)正交试验设计,并对结果进行打分,确定优化体系.[结果和结论]SRAP对苦楝DNA浓度的要求不高,有一个较宽的浓度适宜范围;dNTPs在0.1～0.2 mmol·L-1范围内,能扩增出条带基本相同的清晰谱带;Mg2+为2.0mmol·L-左右时扩增条带较清晰且数量多;引物介于0.48～0.64 μmol·L-均能扩增出带型基本保持一致且清晰的谱带;Taq DNA聚合酶在0.50～2.00 U范围内可以得到清晰的带型.根据正交试验设计16个处理的得分,确定优化的反应体系为:模板DNA 30 ng、dNTPs 0.125 mmol·L-1、Mg2+ 2.25 mmol·L-1、引物0.48 μmol·L-1、Taq DNA聚合酶0.75 U,反应总体积25 μL.