人重组催乳素蛋白的原核表达、纯化及其稳定性分析

• 作者: 刘晓磊 常丽青 张慧丽 王俊山 王战争 韩静 鲁琨
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: PRL 原核细胞 基因表达 纯化 抗原性 稳定性
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 352-355
• 分类号: Q575+.6|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 表达并纯化重组人催乳素(prolactin,PRL)蛋白,并检测其抗原性及稳定性.方法 以商品化的PRLcDNA为模板,PCR扩增目的基因,定向克隆至质粒pET25中,构建重组原核表达质粒PRL-pET25b,转化大肠埃希菌后诱导表达,产物经Ni-NTA亲和层析柱纯化,SDS-PAGE鉴定后,采用Bradford法测定蛋白浓度,PRL定量试剂盒分析抗原性,置-20、4和37℃9d后,分析稳定性.结果 重组表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确,表达的重组PRL蛋白相对分子质量约30 000,以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的15％,纯度大于90％,总蛋白浓度为0.796 mg/ml.重组PRL蛋白于-20、4和37℃放置9d,浓度变化较小,偏差在10％以内.结论 获得了高纯度的重组PRL融合蛋白,抗原性及稳定性均较好,可应用于试剂盒标准品或校准品的制备.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张慧丽		10	36	3.0	6.0
2	常丽青		2	0	0.0	0.0
3	刘晓磊		2	2	1.0	1.0
4	王俊山		1	0	0.0	0.0
5	韩静		2	2	1.0	1.0
6	鲁琨		1	0	0.0	0.0
7	王战争		2	2	1.0	1.0