人抑瘤素M在大肠杆菌中的表达、纯化及其对胆固醇代谢关键基因表达的影响

• 作者: 杜郁 洪斌 王丽 王丽非 袁芳 贾晓健
• 来源期刊: 中国医药生物技术
• 关键词: 抑瘤素 M 原核表达 分子伴侣 胆固醇代谢
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 203-210
• 页数: 8页
• 字数: 6438字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2015.03.003

摘要

目的构建人抑瘤素 M（OSM）的原核表达载体，通过表达及纯化获得重组蛋白，为深入研究 OSM 的功能及机制奠定基础。<br>　　方法利用 PCR 技术，从质粒 pOTB7-hOSM 中扩增出人OSM 蛋白编码序列，与原核表达载体 pET-16b 连接，构建表达质粒 pET16b-OSM。在 BL21(DE3)工程菌中表达目的蛋白，Western blot 法检测 OSM 蛋白的表达。为提高OSM 的可溶性表达，采用共表达分子伴侣的方法提高其上清产物的表达量。将放大发酵的产物处理后，经镍亲和层析法纯化，获得 OSM 成熟蛋白，SDS-PAGE 电泳分析蛋白纯度。MTT 法检测 OSM 对 A375细胞的抑制活性，实时荧光定量 PCR 试验分析 OSM 对 HepG2细胞中胆固醇代谢相关基因（LDLR、ABCA1、ApoA-I 和 SR-BI）表达的影响。<br>　　结果成功构建 pET16b-OSM 原核表达质粒，酶切鉴定和测序分析与预期结果完全一致。在 E. coli BL21(DE3)中实现了目的蛋白的表达，通过共表达分子伴侣质粒 pTf16，进一步提高了可溶性表达的水平。放大发酵产物经镍亲和层析纯化获得 OSM 成熟肽，电泳检测纯度大于98%。MTT 法检测所制备的 OSM 蛋白抑制 A375细胞生长的 EC50为315 ng/ml。mRNA 水平检测证实 OSM 能剂量依赖地上调胆固醇代谢相关的低密度脂蛋白受体和 ABCA1基因的表达。<br>　　结论成功构建了 OSM 的原核表达载体，获得了具有生物学活性的目的蛋白，证实了其对胆固醇代谢关键基因转录的影响，为下一步功能及机制研究奠定基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王丽非	中国医学科学院医药生物技术研究所卫生部抗生素生物工程重点实验室	6	40	3.0	6.0
2	杜郁	中国医学科学院医药生物技术研究所卫生部抗生素生物工程重点实验室	2	3	1.0	1.0
3	贾晓健	中国医学科学院医药生物技术研究所卫生部抗生素生物工程重点实验室	1	1	1.0	1.0
4	袁芳	中国医学科学院医药生物技术研究所卫生部抗生素生物工程重点实验室	1	1	1.0	1.0
5	王丽	中国医学科学院医药生物技术研究所卫生部抗生素生物工程重点实验室	13	114	6.0	10.0