西尔斯山羊草(Aegilops searsii)α-醇溶蛋白编码基因的克隆及原核表达

• 作者: 刘国娟 孔令让 孙鑫 尹华燕 李安飞 杜旭烨 王宏伟 陈呈涛 马信
• 来源期刊: 山东农业大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: α-醇溶蛋白 西尔斯山羊草 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 页码范围: 321-325
• 页数: 5页
• 分类号: S5
• 字数: 3634字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2324.2015.03.001

摘要

醇溶蛋白是小麦加工品质的重要影响因素,主要决定面团的粘性和延展性.根据酸性条件下迁移率的不同,可将醇溶蛋白分为α-,β-,γ-,ω-醇溶蛋白.α-醇溶蛋白占贮藏蛋白的15％～30％,是含量最丰富的一类贮藏蛋白,同时,α-醇溶蛋白中含有一些致敏性的毒性多肽.克隆西尔斯山羊草α-醇溶蛋白基因,并进行序列分析,通过构建原核表达载体,使其在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,并通过切胶纯化法,获得纯度较高的目的蛋白.根据α-醇溶蛋白基因编码区保守序列设计引物,通过PCR扩增克隆得到α-醇溶蛋白基因并进行序列分析.将目的基因KC421089连到表达载体pEASY-E1上,在大肠杆菌BL21 (DE3)中经IPTG诱导表达,获得表达的融合蛋白.通过切胶纯化法,获得纯度较高的目的蛋白.从小麦近缘植物西尔斯山羊草(Aegilops searsii)中首次克隆了7个α-醇溶蛋白编码基因,它们的编码区长度分布在849～954 bp之间,可编码282～317个氨基酸.通过与已发表的其它物种的α-醇溶蛋白氨基酸序列进行多重比对分析,发现这些基因都具有α-醇溶蛋白编码基因典型的结构特点,同时还存在着碱基的缺失、插入以及SNPs.在克隆目的基因的基础上,本研究还通过大肠杆菌体外表达和切胶纯化方法,获得了纯度较高的目的蛋白,实现了该基因的表达.克隆了7个α-醇溶蛋白基因序列,登录号为KC421089的基因可在原核系统中成功表达,并通过切胶纯化法获得目的蛋白,为进一步利用西尔斯山羊草改良小麦加工品质奠定了基础.