羊草CDPK基因全长cDNA的克隆及原核表达

• 作者: 刘忠野 崔喜艳 秦思余 蒋载阳 郭继勋 高瑜
• 来源期刊: 华南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 羊草 CDPK基因 基因克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 页码范围: 123-128
• 页数: 6页
• 分类号: S513.035.2
• 字数: 4652字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.2015.04.022

摘要

[目的]通过对羊草Leymus chinensis CDPK基因进行克隆及原核表达,为进一步研究CDPK基因的功能,探讨羊草适应生境分子机制提供理论基础.[方法]用RT-PCR结合RACE技术克隆了羊草钙依赖蛋白激酶(CDPK)基因,命名为Lc-CDPK;构建了羊草CDPK基因的原核表达载体,转化到大肠埃希菌Escherichia coli BL21(DE3),异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,经SDS-PAGE分析CDPK蛋白的表达情况.[结果和结论]羊草CDPK基因全长cDNA序列为1 704 bp,包括1个1 647 bp的开放阅读框,编码548个氨基酸,从第81 ～339个氨基酸构成了具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化活性的S-TKc结构域,有4个保守的EF手型结构域;编码区核苷酸序列与其他禾本科作物比对后发现,与小麦CDPK基因的相似性最高,相似度为96％;IPTG诱导表达出相对分子质量为61 350的融合蛋白,表达产物大小与预计理论值相符.诱导7h蛋白表达量最高,表达量占菌体总蛋白的49.1％.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	崔喜艳	吉林农业大学生命科学学院	62	454	14.0	18.0
2	刘忠野	吉林农业大学生命科学学院	8	37	4.0	6.0
3	秦思余	吉林农业大学生命科学学院	2	8	2.0	2.0
4	高瑜	吉林农业大学生命科学学院	2	9	2.0	2.0
5	蒋载阳	吉林农业大学生命科学学院	1	4	1.0	1.0