小尾寒羊CIB1基因全长cDNA克隆及原核表达

• 作者: 于艳 刘开东 吕雁飞 孙丹 李宏滨 杜立新 王楚端 陆建 魏彩虹
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 小尾寒羊 CIB1 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2009,（12）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1712-1717
• 页数: 6页
• 分类号: S826.2|S813.3
• 字数: 3798字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2009.12.002

摘要

本研究旨在克隆小尾寒羊钙粘和蛋白1(Calcium and integrin binding protein 1,CIB1)基因cDNA全长,并在原核载体中表达.参照已发表的CIB1基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物,采用RT-PCR法,从小尾寒羊睾丸组织中扩增获得CIB1基因全长cDNA.将其克隆到pMD19-T载体,并进行测序分析.将该基因编码区重组于融合表达质粒pET32a中,构建了重组原核表达载体(pET32a-CIB1).将其转化到BL21(DE3)pLysS宿主菌中,用IPTG进行诱导表达.结果表明,克隆的CIB1基因cDNA与GenBank上登录的牛、猪、猕猴、人、小鼠、大鼠、黑猩猩等动物该基因序列的同源性达90%以上,编码氨基酸的同源性在93%以上,并且该序列包含有完整的开放阅读框,大小为576 bp.实现了高效特异性融合表达,表达产物的分子质量约为38 ku.本研究结果为进一步研究CIB1蛋白功能打下良好的基础.