犬博卡病毒非结构基因NP1多克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 孙玉宁 张茜 张薇 李建宁 闫琰 马婧
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 犬博卡病毒 NP1基因 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（4）
• 所属期刊栏目: 方法学
• 页码范围: 864-869,后插6
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 4381字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20150438

摘要

目的:制备犬博卡病毒(MVC)的非结构基因NP1的兔多克隆抗体,并进行特异性鉴定.方法:以MVC的感染性克隆pI-MVC为模板,构建NP1基因的原核表达质粒pGEX-4T-3-NP1,转化大肠杆菌BL21后,在异巯基-1-硫代-β呋喃半乳糖(IPTG)诱导下,表达谷胱甘肽S-转移酶(GST)-NP1蛋白.用亲和层析纯化的融合蛋白免疫大白兔,制备NP1抗血清并用ELISA法测定抗血清效价.采用Western blotting和免疫荧光法检测NP1抗血清的特性.结果:成功构建MVC NP1基因的原核表达质粒pGEX-4T-3-NP1,在大肠杆菌中获得高效表达.表达产物经亲和层析纯化后得到高纯度的NP1融合蛋白,以其免疫大白兔获得NP1多抗血清,ELISA法检测效价达到1∶400 000.Western blotting法及免疫荧光检测,所得抗血清具有较高的效价及特异性.结论:本研究利用原核表达的MVC GST-NP1融合蛋白制备的NP1抗血清效价高、特异性高,为进一步深入研究NP1在MVC感染及致病分子机制中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李建宁	宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系	24	51	4.0	6.0
2	孙玉宁	宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系	18	58	3.0	7.0
3	张茜	宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系	17	29	3.0	4.0
4	张薇	宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系	5	4	1.0	2.0
5	闫琰	宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系	3	3	1.0	1.0
6	马婧	宁夏医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系	2	6	2.0	2.0