猪博卡病毒NP1基因的克隆与原核表达

• 作者: 何孔旺 俞正玉 倪艳秀 吕立新 周俊明 张雪寒 李彬 毛立 温立斌 茅爱华 郭容利 马俊杰
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪博卡病毒 NP1基因 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 页码范围: 28-31
• 分类号: Q785|S855.3
• 字数: 3339字
• 语种: 中文

摘要

猪博卡病毒是近年来新发现的一种细小病毒.本研究根据其部分基因组序列(GenBank登录号GU902967-GU902971)设计了一对引物,采用PCR方法扩增出了猪博卡病毒的NP1基因,将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建了重组质粒pET32a-NP1,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导表达.结果表明,重组菌可表达分子量为46 kDa的融合蛋白,蛋白表达量较高,而且蛋白以可溶性形式存在于菌体中.表达产物经纯化后,目的蛋白纯度较好.Western Blot结果显示,表达的NP1蛋白能与His抗体发生特异性的免疫反应,表明原核表达的NP1蛋白具有良好的反应原性.