菊粉酶基因的异源表达、分离纯化及酶学性质

• 作者: 侯胜博 李益民 相瑞娟 袁文杰 高教琪
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 马克斯克鲁维 菊粉酶 重组表达 分离纯化 酶学性质
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 工业生物技术
• 页码范围: 670-681
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.140468

摘要

为进一步提高菊粉酶在生物技术领域的应用,研究了来源于马克斯克鲁维酵母Kluyveromyces marxianus YX01的菊粉酶性质.通过在毕赤酵母GS115宿主细胞中异源表达该菊粉酶基因(inu),获得了一种外切型菊粉酶,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证其分子量为86.0 kDa.进一步在该菊粉酶上增加6个His标签,采用聚乙二醇(PEG) 20 000透析浓缩和Ni-NTA Agarose静态亲和吸附作用的方法,完成菊粉酶的分离纯化,纯化倍数和酶回收率分别为3.6和33.1％.比较发现粗酶液与纯酶的酶学性质相似,且菊粉酶的最适反应温度为60℃,最适pH值为4.62,并测得该酶的Km和Vmax值,以菊粉为底物时,Km和Vmax值分别为80.53 g/L和4.49 g/(L·min);以蔗糖底物时,Km和Vmax值分别为183.10 g/L和20.20 g/(L·min).金属离子Mn2+、Ca2+、Cu2+、Zn2+和Fe2+对酶活力具有不同程度的抑制作用,其中Cu2+、Zn2+和Fe2+的抑制作用最为显著.这些研究为进一步提高菊粉酶在工业化的应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	袁文杰	大连理工大学生命科学与技术学院	36	266	10.0	14.0
2	高教琪	大连理工大学生命科学与技术学院	7	33	4.0	5.0
3	李益民	大连理工大学生命科学与技术学院	5	10	2.0	3.0
4	相瑞娟	大连理工大学生命科学与技术学院	1	7	1.0	1.0
5	侯胜博	大连理工大学生命科学与技术学院	3	9	2.0	3.0