一个外切菊粉酶基因的克隆表达及酶学性质

• 作者: 熊伍平 王成华 王青艳 申乃坤 陆雁 黄日波
• 来源期刊: 生物加工过程
• 学科: 生物学
• 关键词: 菊粉酶 表达 马克斯克鲁维酵母 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 研究与开发
• 页码范围: 40-45
• 页数: 6页
• 分类号: Q556.2
• 字数: 4592字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3678.2013.03.008

摘要

从马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)DSM 5418中克隆出外切菊粉酶(INU)的成熟肽编码区域,在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中实现了高效分泌表达,体积酶活力达到15.27 U/mL,进一步对重组酶进行了纯化与表征.经过(NH4)2SO4沉淀、透析和分子筛过滤后,得到了纯度大于95％的纯化重组酶,SDS-PAGE分析发现INU的表现相对分子质量为9.0×104,大于理论预测值6.0×104.纯化酶液的表征结果表明,INU的最适温度和最适pH分别为55℃和5.0,在此条件下INU对菊粉的Km值和比酶活分别为1.90 mmol/L和433.86 U/mg,对蔗糖的Km值和比酶活分别为27.81 mmol/L和1 249.49 U/mg,I/S值为0.34；HPLC分析表明,INU酶解菊粉的产物由果糖和葡萄糖组成；金属离子Mn2+、Fe3+、K+和Co2+对酶有促进作用,而Zn2+、Cu2+、Ni2+、SDS和EDTA对酶活力有不同程度的抑制作用.