川牛膝MSAP反应体系的优化及引物筛选＊

• 作者: 周碧乾 文静 王文韬 陈新 马云桐 黄凤
• 来源期刊: 世界科学技术-中医药现代化
• 学科: 医学
• 关键词: 川牛膝 MSAP 预扩增 选择性扩增 引物筛选
• 年，卷（期）: 2015,（9）
• 所属期刊栏目: 中药研究
• 页码范围: 1860-1865
• 页数: 6页
• 分类号: R285.5
• 字数: 3611字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11842/wst.2015.09.020

摘要

目的：首次对川产道地药材川牛膝表观遗传多样性进行研究，建立并优化川牛膝甲基化敏感扩增多态性技术（MSAP）最佳反应体系。方法：以川牛膝苗期叶片为材料，利用正交试验设计对川牛膝MSAP反应体系中预扩增和选择性扩增中关键影响因素进行考察，建立川牛膝MSAP反应最佳体系。结果：川牛膝MSAP最佳反应体系为：酶切体系（20μL），300 ng DNA、1.5μL EcoRI、1.5μL HpaII或1.5μL MspI （HpaII）；连接体系（25μL）：15μL酶切产物、1μL EcoRI adaptor、1μL HpaII/MspI adaptor、0.2μL T4连接酶；预扩增体系（25μL）：连接产物1μL、rTaq酶1 U、引物分别1.5μL、dNTP 2μL；选择性扩增体系（25μL）：预扩产物稀释50倍、rTaq酶1 U、引物1.5μL、dNTP 3μL，并运用优化后的体系，最终从川牛膝MSAP的256对引物中筛选出有效引物6对。结论：优化后的体系保证了稳定的图谱、清晰的条带，筛选出的6对引物组合特异性好，能够用于后续川牛膝DNA甲基化相关实验研究，同时，为其他药用植物MSAP分析提供了参考。