钠通道重叠综合征相关基因SCN5A在H9C2细胞中的表达

• 作者: 史瑞明 吕颖 孙超峰 张军波 马爱群 高洁
• 来源期刊: 新乡医学院学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 钠通道 SCN5A基因 重叠综合征 H9C2细胞
• 年，卷（期）: 2015,（11）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 975-980
• 分类号: Q786
• 语种: 中文
• DOI: 10.7683/xxyxyxb.2015.11.001

摘要

目的 构建表型重叠家系相关基因SCN5A delQKP1507-1509突变型真核表达载体,研究其在H9C2细胞中的表达.方法 一步法定点诱变技术构建SCN5A基因delQKP1507-1509突变型真核表达载体,电穿孔方法将野生型和突变型质粒转染至H9C2细胞,应用实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)及Western blot技术检测其mRNA及蛋白表达情况.结果 琼脂糖凝胶电泳法及DNA直接测序法均表明定点突变成功,RFQ-PCR及Western blot结果显示,野生组、突变组和混合组SCN5A基因mRNA相对表达量分别为1.089±0.459、1.011±0.840和1.069±0.492,3组SCN5A基因mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05).野生组、突变组和混合组SCN5A蛋白在H9C2细胞的相对表达量分别为3.781±0.221、3.466±0.176和3.714±0.198,3组SCN5A蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功构建钠通道基因delQKP1507-1509突变型真核表达载体并转染至H9C2细胞,该突变未引起钠通道在细胞膜的异常表达,为进一步功能研究提供了研究基础及方向.