大肠杆菌O157:H7微滴数字PCR定量方法的建立

• 作者: 姜君 张玲 王晶 王江南 董莲华 陈唯军
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: 微滴数字聚合酶链式反应 大肠杆菌O157:H7 拷贝数
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 页码范围: 319-324
• 页数: 6页
• 字数: 5378字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11895/j.issn.0253-3820.140569

摘要

以大肠杆菌O157：H7(E. coli O157：H7)rfbE基因为靶基因,建立了可对其准确定量的微滴数字PCR( ddPCR)方法。对ddPCR反应中的探针浓度进行了优化,考察了方法的线性范围、精密度、定量限和检出限。最终确定ddPCR 反应中的最佳探针浓度为300 nmol/L。 E. coli O157：H7基因组 DNA 浓度范围为4~1.25×105拷贝/20μL ddPCR反应液时,ddPCR方法线性相关系数( R2)为0.999。当DNA浓度为760~88400拷贝/20μL 时,方法的精密度最好( RSD<5%)。本方法的定量限为4拷贝/20μL,检出限为3拷贝/20μL。特异性验证结果表明,建立的ddPCR方法特异性良好,对13份猪肉、牛肉和鸡肉样品的检测结果与定量PCR方法检出结果一致。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王晶		107	406	10.0	15.0
2	陈唯军	中国科学院北京基因组研究所基因组科学与信息重点实验室	9	71	4.0	8.0
3	张玲		23	80	5.0	8.0
4	董莲华		26	121	6.0	9.0
5	姜君	中国科学院北京基因组研究所基因组科学与信息重点实验室	5	44	3.0	5.0
6	王江南		1	32	1.0	1.0