牛偏爱密码子优化后的Beta蛋白多克隆抗体制备

• 作者: 周欢敏 房君 王海涛 邢燕平 钱呈 齐昱
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 密码子优化 Beta蛋白 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（10）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 1759-1765
• 页数: 7页
• 分类号: S823.2
• 字数: 4613字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.10.008

摘要

本研究旨在优化λ噬菌体bet基因,使其能够在牛细胞中高效表达,通过密码子优化及全基因合成方法制备牛bet基因,并进行原核表达和多克隆抗体制备及抗体效价评估.从GenBank中获得λ噬菌体bet基因的序列,登录号为AP005153,用牛偏爱密码子对其进行优化并将其合成.根据优化后的基因序列设计引物,用PCR扩增优化后的bet基因,随后将其克隆到pET28原核表达载体,并转化入大肠杆菌BL21中进行诱导表达.表达的蛋白产物利用亲和层析的方法进行纯化,用His tag的抗体进行Western blot鉴定.用纯化后的蛋白免疫CD1小鼠,得到抗Beta蛋白的血清,通过ELISA测定该多克隆抗体的滴度.结果表明:通过双酶切和测序,成功挑选出正确的原核表达质粒pET-bet;SDS-PAGE,电泳结果显示融合蛋白表达成功;用纯化后的蛋白免疫试验鼠后得到多克隆抗体,经Western blot检测,该多克隆抗体能与His-Beta融合蛋白特异性结合;经ELISA方法检测该多克隆抗体的滴度为1:41 700.成功地制备了Beta蛋白的多克隆抗体,为深入探索bet基因的生物学功能和在牛及大型哺乳动物中的应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周欢敏	内蒙古农业大学生命科学学院	86	473	10.0	19.0
2	钱呈	内蒙古农业大学生命科学学院	5	43	3.0	5.0
3	邢燕平	内蒙古农业大学生命科学学院	13	14	3.0	3.0
4	齐昱	内蒙古农业大学生命科学学院	7	8	2.0	2.0
5	房君	内蒙古农业大学生命科学学院	7	11	3.0	3.0
6	王海涛	内蒙古农业大学生命科学学院	5	11	3.0	3.0