杜氏盐藻MAPKK激酶基因DsMAPKKK的克隆、原核表达与纯化

• 作者: 刘丽颖 刘艺琼 柴晓杰 武天祥 王逸云
• 来源期刊: 中国农学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 杜氏盐藻 DsMAPKKK 原核表达 纯化 蛋白印迹
• 年，卷（期）: 2015,（23）
• 所属期刊栏目: 生物科学
• 页码范围: 53-57
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

为了进一步研究MAPKK激酶的生理功能,利用RT-PCR技术扩增了DsMAPKKK的开放阅读框序列,并利用T4连接酶与质粒pGS21a连接,构建了原核表达载体pGS21 a-DsMAPKKK.将该重组质粒导入大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞,经IPTG诱导成功表达了融合蛋白.经SDS-PAGE检测,融合蛋白在上清和包涵体中均存在.可溶性蛋白经过GST柱纯化,电泳分析结果表明,在68 kD左右有单一的蛋白条带,说明融合蛋白得到有效纯化.蛋白印迹结果显示在68 kD左右有明显的杂交条带,初步证明纯化的蛋白就是带有GST标签的MAPKK激酶.DsMAPKKK的成功表达与纯化,为深入探讨DsMAPKK激酶的性质及功能打下了坚实的基础.