硒蛋白X基因克隆、定点突变、原核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 刘光芒 周继昌 曹蕾 汤加勇 王康宁 贾刚 赵华 陈小玲
• 来源期刊: 动物营养学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪SelX基因 克隆 定点突变 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 分子营养
• 页码范围: 1485-1491
• 页数: 7页
• 分类号: S828
• 字数: 6089字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-267x.2015.05.019

摘要

本试验旨在克隆鉴定猪硒蛋白X ( SelX )基因,将其定点突变后进行原核表达,获得重组蛋白,并制备猪SelX多克隆抗体,为以猪为模型SelX功能研究奠定基础. 利用cDNA末端快速克隆( 3′?RACE)技术从猪肝脏总RNA扩增出含开放阅读框( ORF)至poly( A)共1 215 bp的SelX基因cDNA片段,其348 bp的ORF编码区和对应的氨基酸残基与人相应序列分别有88%和91%序列同源性,猪SelX基因提交NCBI GenBank数据库,序列号为EF113597. ORF编码氨基酸残基中硒代半胱氨酸( Sec)位于C-端第95个残基,其编码密码子TGA经定点突变为半胱氨酸( Cys)的TGT后,将其插入载体pET30,转入大肠杆菌BL21( DE3)中,在0.5 mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷( IPTG)诱导2 h获得融合表达产物,经His?tag亲和层析后,获得分子质量为18.0 ku的纯化蛋白. 将纯化获得的SelX基因突变体融合蛋白( SelXm)免疫兔子,得到效价高达1:20 000的多克隆抗体,免疫印迹( Western?blot)结果显示该抗体能特异性识别纯化的SelXm和猪肝脏中相应SelX. 本试验成功克隆并鉴定了猪SelX基因,并制备了其多克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	贾刚	四川农业大学动物营养研究所	74	600	12.0	20.0
2	王康宁	四川农业大学动物营养研究所	161	1723	22.0	32.0
3	赵华	四川农业大学动物营养研究所	32	190	8.0	13.0
4	陈小玲	四川农业大学动物营养研究所	36	171	7.0	12.0
5	汤加勇	四川农业大学动物营养研究所	14	86	5.0	9.0
6	曹蕾	四川农业大学动物营养研究所	1	1	1.0	1.0
7	周继昌	深圳市慢性病防治中心分子生物学实验室	33	111	5.0	9.0
8	刘光芒	四川农业大学动物营养研究所	26	127	6.0	10.0