小鼠膜型抗衰老蛋白Klotho基因特异片段的克隆、原核表达及多克隆抗体制备

• 作者: 朱国萍 潘红春 童睿 郝家胜 马静静
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 抗衰老蛋白 Klotho基因 GST融合蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2009,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 208-213
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 字数: 5348字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2009.03.005

摘要

目的 克隆小鼠膜型抗衰老蛋白Klotho基因特异片段,制备小鼠Klotho多克隆抗体.方法 以小鼠基因组为模板进行PCR,克隆了小鼠膜型抗衰老蛋白Klotho基因外显子Ⅳ部分序列,经BamHⅠ和NheⅠ双酶切后定向克隆到质粒pET-GST中,构建原核表达质粒pET-GST-Klotho,转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达.以重组GST-Klotho融合蛋白免疫家兔, 制备Klotho多克隆抗体.结果 表达产物经SDS-PAGE检测表明,在大肠埃希菌中成功表达了GST-Klotho融合蛋白,GST-Klotho融合蛋白表达量占菌体总蛋白的15 %左右;另外通过ELISA法测得抗血清抗体效价约为1∶ 10 000,Western印迹分析验证了抗体特异性.结论 GST-Klotho融合蛋白的表达和Klotho多克隆抗体的制备为进一步研究Klotho蛋白在小鼠体内的表达模式以及相关抗衰老药物的研制奠定了基础.