大鼠CRH基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

• 作者: 宋英 张咏梅 秦霞
• 来源期刊: 江苏医药
• 学科: 医学
• 关键词: 促肾上腺皮质激素释放激素基因 RNA干扰 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 873-875
• 页数: 3页
• 分类号: R338
• 语种: 中文

摘要

目的：构建针对大鼠促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）基因的RNA干扰（RNAi）慢病毒表达载体并进行鉴定。方法针对CRH基因设计4个RNAi靶点并分别构建入慢病毒骨架载体，测序鉴定。过表达质粒和RNAi质粒共转染293T工具细胞后，用Western blot进行外源筛靶以确定有效靶序列。有效RNAi病毒质粒与辅助质粒通过Lipofectamine 2000共转染293T细胞，培养48 h后，收集细胞培养上清液，将其浓缩后用孔稀释法测定病毒滴度。结果 Western blot外源筛靶显示3个靶点能有效敲减目的基因的表达。测定浓缩病毒悬液的滴度为1．5×109 T U／ml。结论成功构建了CRH基因的RNAi慢病毒载体，可用于CRH在应激反应中作用的研究。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张咏梅	徐州医学院麻醉学院生理学教研室江苏省麻醉学重点实验室	61	285	10.0	12.0
2	宋英	徐州医学院麻醉学院生理学教研室江苏省麻醉学重点实验室	19	40	3.0	5.0
3	秦霞	徐州医学院麻醉学院生理学教研室江苏省麻醉学重点实验室	13	18	3.0	4.0