重组抗狂犬病病毒抗体在HEK293EBNA1细胞中的瞬时表达优化

• 作者: 乔玉玲 安晨 李晓进 毛晓燕 秦海艳 陈继军
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 生物学
• 关键词: HEK293 EBNA1 无血清悬浮培养 抗体瞬时表达 实验设计
• 年，卷（期）: 2015,（33）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 6439-6443,6454
• 分类号: Q812
• 语种: 中文
• DOI: 10.13241/j.cnki.pmb.2015.33.010

摘要

目的:优化重组抗体在悬浮无血清培养的HEK293 EBNA1瞬时表达,提高重组抗体表达量.方法:将HEK293 EBNA1细胞适应于无血清悬浮培养,筛选适宜的无血清培养基.使用PEI转染质粒进入细胞,瞬时表达重组抗体;使用Modde软件进行实验设计(DOE),优化转染质粒量、轻重链比例、PEI量等影响瞬时表达的条件.培养上清经亲和纯化,获得目标抗体,用快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)测定抗体活性,用BCA法测定纯化抗体浓度.结果:293 SFMII为适宜的HEK293 EBNA1细胞无血清悬浮培养基.对抗体表达影响最大的因素是轻重链比例(P=0.00000),其次为质粒浓度(P=0.00086),最后为PEI(P=0.00257).优化的转染条件为:质粒用量0.61 μg/106细胞,轻重链比例2:1,PEI 2.67 μg/106细胞,优化后抗体表达量有显著提高(P=0.007).结论:通过DOE优化获得了重组抗狂犬病病毒抗体的高水平表达,抗体表达量提高了至少50倍.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	秦海艳		6	40	2.0	6.0
2	毛晓燕		17	72	4.0	7.0
3	陈继军		10	22	3.0	3.0
4	乔玉玲		10	56	3.0	7.0
5	李晓进		5	39	2.0	5.0
6	安晨		6	5	2.0	2.0