利用低温聚合酶链式反应技术提高大豆超氧化物歧化酶活性

• 作者: 关淑艳 张丽媛 徐丹丹 曲静 王丕武 赵邯郸 马红丹
• 来源期刊: 食品科学
• 学科: 生物学
• 关键词: 超氧化物歧化酶基因 低温聚合酶链式反应 酶活力
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 所属期刊栏目: 生物工程
• 页码范围: 126-130
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3959字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7506/spkx1002-6630-201505024

摘要

目的:利用低温聚合酶链式反应对大豆超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性进行改良.方法:将6种在较低退火温度下扩增出的超氧化物歧化酶基因插入到表达载体pREP5N上,构建pPM1、pPM2、pPM3、pPM4、pPM5、pPM6表达载体,转入大肠杆菌后得到工程菌,诱导其在大肠杆菌中进行蛋白表达,并进行酶活力测定,筛选高酶活力菌株.结果:将已克隆的目的基因序列与已知的大豆MnSOD基因序列比对分析,一致性平均为86.57％,氨基酸序列同源性平均为82.58％.对已获得的6种工程菌进行蛋白质提取,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示表达产物的分子质量约为26 kD.经1％差异水平分析,改良后的SOD酶活力均有极显著提高,平均比对照菌株的酶活力提高1.95倍.结论:本实验证明低温聚合酶链式反应是改变酶活性的一种有效方法,为超氧化物歧化酶在生产中的应用提供了技术支持.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曲静	吉林农业大学农学院	73	262	8.0	11.0
2	王丕武	吉林农业大学农学院	249	1853	20.0	32.0
3	关淑艳	吉林农业大学生命科学学院	110	634	12.0	18.0
4	徐丹丹	吉林农业大学生命科学学院	8	19	2.0	3.0
5	赵邯郸	吉林农业大学生命科学学院	8	30	3.0	5.0
6	张丽媛	吉林农业大学生命科学学院	5	26	3.0	5.0
7	马红丹	吉林农业大学生命科学学院	6	30	4.0	5.0