副溶血性弧菌所致食物中毒实时荧光定量PCR筛查方法的建立及应用

• 作者: 曾细嫦 肖锦晖 谷素英 骆秋云
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 副溶血性弧菌 实时荧光定量PCR 食物中毒
• 年，卷（期）: 2015,（23）
• 所属期刊栏目: 微生物检测方法
• 页码范围: 4046-4048
• 页数: 3页
• 分类号: R446.5
• 语种: 中文

摘要

目的 建立副溶血性弧菌(VP)的实时荧光定量PCR测定方法.方法 利用副溶血性弧菌toxR基因DNA序列设计引物和探针,用细菌标准菌株检测方法的特异性,VP纯培养液及模拟污染食物测定方法的灵敏度和重复性,并应用在2012年-2014年疑似细菌食物中毒调查中.结果 当标准曲线在2.5×101 copy～2.5×106 copy时,线性关系良好,相关系数为0.9986,线性方程为y=-3.4132x +38.919 5;仅VP标准菌出现典型的"S"形荧光扩增曲线;质粒检测灵敏度为25 copy/ml,直接能检测到的最低菌液浓度:纯培养液为21 cfu/ml,模拟食品为1.8×102 cfu/ml;同一模拟食品(1.8×104 cfu/ml)测定的重复性好(批内Ct值变异系数为1.12％,批间变异系数为1.70％);食物中毒RT-PCR结果为阳性的26份肛拭中16份分离到VP,1份阳性食品分离出VP,未发现假阳性.结论 本法快速、敏感、特异性好,在细菌性食物中毒检测的筛查中可大大提高检测效率.