非受体型酪氨酸激酶JAK1基因真核表达质粒的构建与真核表达

• 作者: 刘天才 吴英松 庄斯慧 梁君瑜 郭欣欣
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 非受体型酪氨酸激酶 JAK1基因 293T细胞 真核表达
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 18-22
• 页数: 5页
• 分类号: Q343.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2016.01.004

摘要

[目的]构建非受体型酪氨酸激酶JAK1(nonreceptor tyrosine kinase-JAK1)基因真核表达质粒pcDNA4.0-His-JAK1,并转染293T细胞进行真核表达.[方法]从Hela细胞中提取总的RNA,通过RT-PCR获得JAK1基因全长cD-NA序列,并将其克隆至真核表达载体pcDNA4.0-His中,构建重组质粒pcDNA4.0-His-JAK1.将真核重组表达质粒转染293T细胞,转染48 h后,在荧光显微镜下观察转染情况.免疫印迹法检测JAK1蛋白转染24 h、36 h与48 h在293T细胞中的表达.[结果]经双酶切与质粒PCR鉴定质粒克隆正确,测序鉴定序列中第2199位碱基A突变为G,为同义突变,不影响氨基酸序列.转染293T细胞48 h后,间接免疫荧光实验显示在293T细胞中检测到绿色荧光.免疫印迹检测可见大小约为133 kDa的目的蛋白.[结论]成功获得JAK1基因全长序列,并成功构建pcDNA4.0-His-JAK1真核重组表达质粒,并在真核细胞293T中获得有效表达,为进一步研究JAK1蛋白质相互作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴英松		123	499	11.0	16.0
2	刘天才		20	86	4.0	8.0
3	庄斯慧		3	5	1.0	2.0
4	郭欣欣		4	4	1.0	2.0
5	梁君瑜		2	1	1.0	1.0