LNA探针实时荧光定量PCR检测小麦矮缩病毒体系的建立

• 作者: 刘艳 王亮 王锡锋
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 小麦矮缩病毒 LNA探针 荧光定量PCR 检测
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 病原学
• 页码范围: 313-319
• 页数: 7页
• 分类号: S432.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13926/j.cnki.apps.2016.03.004

摘要

本研究通过对多个小麦矮缩病毒(Wheat dwarf virus,WDV)小麦分离物进行序列分析,在编码Rep蛋白N端的基因保守区域设计一对特异性引物和一条长度为19 bp的TaqMan LNA探针,经过探针和引物浓度的系列优化,建立了WDV田间样品LNA探针实时荧光定量PCR检测方法,确定最优反应条件下的引物和探针终浓度分别为0.5μmol/L和0.3μmol/L.该方法建立的标准曲线斜率及相关系数分别为-3.424 3和0.997 3,扩增效率为96.0％,重复性试验组内变异系数为0.11％ ～ 1.34％,组间变异系数为0.44％～ 1.21％,最低检测限为55 copies/μL,其灵敏度是普通PCR的100倍以上.与普通TaqMan探针荧光定量PCR相比,该方法所用探针长度大大缩短,减少了探针间形成二级结构的机会,探针设计更加简单、方便.该方法适用于田间样品的早期监测,为病害流行调查提供了高效快捷的技术支撑.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王锡锋	中国农业科学院植物保护研究所	44	383	12.0	17.0
2	刘艳	中国农业科学院植物保护研究所	38	249	9.0	14.0
3	王亮	中国农业科学院植物保护研究所	21	141	5.0	11.0