VP60 loop区的突变对RHDV VLP功能的影响

• 作者: 宋艳华 徐为中 李珊珊 王芳 胡波 范志宇 薛家宾 魏后军
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 兔出血症病毒VP60 重叠延伸PCR 嵌合蛋白 血凝特性 HBGA受体结合
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 页码范围: 297-304
• 分类号: S858.2|S912.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/jnau.201507014

摘要

[目的]从病毒样颗粒(VLP)的形戒、血凝特性以及受体组织血型抗原(HBGA)结合特性方面,分析VP60 loop区在兔出血症病毒(RHDV)VLP功能中的作用.[方法]针对RHDV VP60蛋白的loop区411～417位氨基酸对应的基因设计引物,通过SOE法将411～417位氨基酸等量替换成柔性氨基酸GSGGSGG,获得重组基因VP60-411-417,利用杆状病毒表达系统获得重组病毒rAc-VP60-411-417.将重组病毒接种Sf9细胞,通过IFA、SDS-PAGE和Western blot等方法证明嵌合蛋白P411-417的表达.通过负染透射电镜观察嵌合蛋白VLP的形成,利用血凝试验分析嵌合蛋白的血凝特性,利用合成多糖结合试验分析嵌合蛋白的受体结合特性.[结果] Western blot、IFA和负染透射电镜试验结果显示,嵌合蛋白P411-417得到有效表达,且能够形成完整的VLP;合成多糖结合试验结果显示,嵌合蛋白能够特异性结合HBGA,但其血凝特性消失.[结论]411～417位氨基酸的突变显著影响RHDV的血凝特性,不影响VLP的形成以及结合HBGA的能力,说明该区域是血凝特性的相关位点,但不是HBGA受体结合的关键位点.