重组人胶原绑定骨形态发生蛋白2在大肠杆菌中的表达、纯化与复性

• 作者: 付川 冯祥汝 吴乃蓬 宋佳 武振旭 王宇 王宗良 王春艳 高田林
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 胶原结合结构域 骨形态发生蛋白 2 包涵体 复性
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 226-230
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 4790字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20160207

摘要

目的：利用大肠杆菌表达体系制备带有胶原结合结构域（CBD）的骨形态发生蛋白2（BMP2），研究CBD-BMP2表达、纯化及复性的条件和方法。方法：将具有胶原结合能力的CBD基因序列克隆入 BMP2基因序列的 N端，构建重组蛋白表达质粒 pet21b／CBD-BMP2，转化入工程性大肠杆菌 BL21菌株内；37℃条件下添加诱导剂异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）持续诱导表达；采用 Ni-NTA亲和层析柱进行纯化；运用超纯水稀释复性法对纯化后的CBD-BMP2进行复性；0.22μm微孔滤膜对复性后蛋白除菌，通过除菌前后蛋白浓度比值计算回收率；聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测重组蛋白表达、纯化以及复性；BCA蛋白定量法测定蛋白浓度。结果：重组质粒 pet21 b／CBD-BMP2在工程性大肠杆菌中得到充分表达；CBD-BMP2以包涵体形式表达；SDS-PAGE分析，8 mol·L－1尿素存在条件下目的蛋白溶解于裂解液上清中，经纯化后目的蛋白单体存在于洗脱液B中，单体相对分子质量约为14000；稀释复性后SDS-PAGE分析，相对分子质量14000及28000处可见2条清晰条带，重组蛋白单链成功复性为二聚体结构，相对分子质量约为28000；过滤除菌前后目的蛋白浓度分别为110和80 mg·L－1，回收率约为73％。结论：重组CBD-BMP2载体成功转化至大肠杆菌内，CBD-BMP2蛋白得到了高效的表达和复性。建立了利用原核表达体系制备重组CBD-BMP2蛋白的实验方法。