产碱假单胞菌碱性脂肪酶的克隆表达及酶学性质

• 作者: 刘恒嘉 刘明瑞 刘滔滔 杜丽琴 梁智群 韦宇拓
• 来源期刊: 广西科学
• 学科: 工学
• 关键词: 产碱假单胞菌 碱性脂肪酶 共表达 酯化
• 年，卷（期）: 2016,（3）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 248-254
• 页数: 7页
• 分类号: Q78|TQ925+.6
• 字数: 4875字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13656/j.cnki.gxkx.20160713.008

摘要

【目的】为获得可应用于酯类水解及合成的脂肪酶资源,本研究通过筛选分离得到能够水解长链脂肪酸酯的脂肪酶产生菌,克隆表达其脂肪酶基因并研究脂肪酶的酶学性质。【方法】从环境中筛选分离出可水解三硬脂酸甘油酯的菌株,利用16S rDNA对其进行分子鉴定,并扩增其脂肪酶基因和脂肪酶分子伴侣基因。以 pET-22 b(+)为表达载体,构建共表达重组质粒,转化Escherichia coli BL21(DE3)进行异源表达,并对重组酶进行酶学性质研究。【结果】经16 S rDNA鉴定该菌株为产碱假单胞菌Pseudomonas alcaligenes。通过 PCR 成功克隆到该菌的脂肪酶基因(lipPA-9A)和脂肪酶分子伴侣基因(lipPA-9B),并构建共表达重组质粒 pET22b-lipPA-9A-9B ,实现脂肪酶 LIP-9 A的活性表达。酶学性质研究表明 LIP-9 A的最适反应温度为35℃,最适反应 pH值为10.5,最适反应底物为对硝基苯酚辛酸酯(pNPO)；同时,LIP-9A 还可以催化醇和羧酸发生酯化反应产生酯类物质。【结论】LIP-9 A在碱性条件下具有较高活力,且可以催化酯化反应,在洗涤行业和酯合成领域具有一定的应用价值。