lefty1基因真核表达载体构建鉴定及转染

• 作者: 张杰 徐长庚
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: lefty1 真核表达载体 Flag标签
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法学研究
• 页码范围: 76-80
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.14188/j.1671-8852.2016.01.017

摘要

目的:构建lefty1基因与pcDNA3.1(+)相融合的真核表达载体,并在lefty1基因的下游加上Flag标签,转染人肾小管上皮细胞株验证重组质粒活性.方法:设计并合成lefty1基因上下游引物,同时加上Flag标签序列,PCR扩增基因,并将其连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)上,双酶切图谱分析和扩增产物测序鉴定所构建的真核表达载体.脂质体转染法将重组质粒pcDNA3.1(+)-lefty1-Flag和pcDNA3.1(+)分别转染至人肾小管上皮细胞株HK-2,qPCR和Western blot检测lefty1在mRNA和蛋白水平的表达.结果:以lefty1基因质粒模板扩增得到的片段约1 150 bp,双酶切得到目的基因片段,测序的结果显示与lefty1基因序列相同.转染肾小管上皮细胞后,pcDNA3.1(+)-lefty1-Flag能表达lefty1蛋白.结论:成功构建lefty1基因真核表达载体,为一步研究lefty1基因功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张杰	武汉大学人民医院泌尿外科	283	1497	19.0	26.0
5	徐长庚	武汉市中心医院泌尿外科	1	0	0.0	0.0