重组人survivin腺病毒的构建与鉴定

• 作者: 刘宇伟 吴娟娟 张帅 樊再雯
• 来源期刊: 空军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: survivin 腺病毒 RNA干扰 肺动脉平滑肌细胞 缺氧
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 论 著
• 页码范围: 361-364
• 页数: 4页
• 分类号: R511.8
• 字数: 3004字
• 语种: 中文

摘要

目的构建人survivin基因shRNA重组腺病毒载体，为缺氧性肺动脉高压（Hypoxic pulmonary hypertension， HPH）的基因治疗研究提供实验基础。方法构建survivin-siRNA表达质粒，测序鉴定正确后，将survivin-siRNA表达质粒与含有腺病毒右臂的骨架质粒pBHGE3共转染至人293A细胞，包装成腺病毒Ad-survivin并扩增，TCID50法测定病毒滴度。将人肺动脉平滑肌细胞缺氧培养24 h，并将细胞分为空白对照组（Con组），阴性对照组（Ad-LacZ组），不同Ad-survivin序列的干扰组（sh1组、sh2组、sh3组）。Ad-survivin感染缺氧人肺动脉平滑肌细胞，Western blot检测survivin蛋白，验证重组腺病毒干扰效果。结果①将shRNA片段与pAd-U6-CMV连接后的质粒进行测序，结果提示目的基因片段插入成功；②TCID50法测定病毒Ad-survivin-shRNA1、Ad-survivin-shRNA2和Ad-survivin-shRNA3的滴度分别是1×1010，1.2×1010，1×1010；③sh2组缺氧人肺动脉平滑肌细胞内survivin蛋白表达明显低于其他4组(P＜0.05)。结论本研究成功构建人survivin腺病毒载体，为研究survivin基因在缺氧性肺动脉高压中的作用提供了实验基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张帅	河北省沧州市人民医院呼吸内科	4	7	2.0	2.0