白曲霉酸性蛋白酶在黑曲霉中表达

• 作者: 吴婷 张会 李健友 李杰 杨建乐 王欣 马南
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 酸性蛋白酶 黑曲霉 同源重组 分泌表达
• 年，卷（期）: 2016,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 29-35
• 页数: 7页
• 分类号: Q815
• 字数: 4051字
• 语种: 中文

摘要

研究分析固态发酵酸性蛋白酶生产菌株及其产品，ITS序列鉴定结果表明，该菌株为曲霉属，质谱分析结果表明其产品为Aspergillus saitoi酸性蛋白酶Aspergillopepsin I（EC.3.4.23.18）。根据Aspergillus saitoi酸性蛋白酶Aspergillopepsin I基因序列pep1（GI：473517）设计引物，以固态发酵酸性蛋白酶生产菌株基因组DNA为模板，利用PCR技术扩增获得pep1基因。序列分析结果表明，扩增片段与白曲霉Aspergillus kawachii酸性蛋白酶基因组序列相似性为99%，其编码蛋白与白曲霉Aspergillus kawachii酸性蛋白酶（GAA90749.1）相似性为100%，将该基因命名为pepB。构建黑曲霉表达载体pSZHG-pepB，通过农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462，筛选得到在glaA位点发生同源重组纯合转化子。经摇瓶发酵后，对产物进行SDS-PAGE、酶活检测以及酸性蛋白酶酶学性质和酶稳定性研究。结果表明，纯合同源重组菌株经SDS-PAGE检测时在47 ku左右处有明显目的蛋白条带，其发酵产物酸性蛋白酶酶活达5543 U·mL-1，为出发菌株152倍。对菌株所产酸性蛋白酶酶学性质研究发现，该酶最适反应温度为50℃，最适反应pH 3.0，在4℃和25℃条件下，酶在pH 3.0~4.0时较稳定。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李杰	东北农业大学生命科学学院	193	1723	20.0	30.0
2	吴婷	东北农业大学生命科学学院	1	9	1.0	1.0
3	马南	东北农业大学生命科学学院	1	9	1.0	1.0
4	王欣	东北农业大学生命科学学院	15	71	5.0	8.0
5	杨建乐	东北农业大学生命科学学院	2	16	2.0	2.0
6	李健友	东北农业大学生命科学学院	2	10	1.0	2.0
7	张会	东北农业大学生命科学学院	9	42	3.0	6.0