Betatrophin重组腺病毒过表达载体的构建

• 作者: 刘媛馨 尹卫 庄若 杨奇超 杨玲 王东 王苏 蒋丹 薛颢颖
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: betatrophin 增强型绿色荧光蛋白 同源重组
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 124-127,131
• 页数: 5页
• 分类号: R393
• 字数: 3643字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y150283

摘要

目的:应用基因同源重组技术,构建及鉴定携带小鼠betatrophin基因Gm6484(NM_001080940)的复制缺陷型重组腺病毒载体,为进一步研究betatrophin的功能奠定基础.方法:根据基因库中登录的小鼠betatrophin基因Gm6484(NM_001080940)序列,经化学合成得到含BamH Ⅰ/Age Ⅰ酶切位点的小鼠betatrophin基因全长cDNA质粒,将其酶切后插入到带有增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的GV314载体CMV-MCS-3 FLAG-SV40-EGFP中,得到重组病毒穿梭质粒pGV314-betatrophin;经BamH Ⅰ/Age Ⅰ双酶切后,与线性化的pDC315病毒基因组质粒体外同源重组,构建含有目的基因的腺病毒载体Ad-betatrophin,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染HEK293T细胞包装成重组病毒颗粒,经在HEK293T细胞反复扩增数代后,利用聚合酶链式反应(PCR)、蛋白质印迹法及测序鉴定重组的腺病毒.结果:阳性克隆质粒Ad-betatrophin在HEK293T细胞中成功包装出重组病毒,经PCR、蛋白质印迹及测序检测表明重组腺病毒包装成功.结论:成功构建了携带小鼠betatrophin 基因的复制缺陷型重组腺病毒过表达载体.