CYP3 A4*1 G依赖的 CYP3 A4内含子10启动的真核表达载体的构建

• 作者: 张卫 张莉蓉 曾昭书 杨卫红 王沛 赵云龙 闫良 魏璐嫚
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: CYP3 A4 真核表达载体 启动子 内含子
• 年，卷（期）: 2016,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 153-157
• 页数: 5页
• 分类号: R394.6|Q756
• 字数: 2655字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13705/j.issn.1671-6825.2016.02.004

摘要

目的：构建CYP3A4*1G依赖的CYP3A4内含子10启动的真核表达载体，研究CYP3A4*1G依赖的CYP3A4内含子10的启动子功能。方法：以质粒pGEM-CYP3A4为模板扩增出CYP3A4 cDNA，PCR产物经EcoRV、XbaⅠ双酶切后插入到pcDNA3．1／Hygro（＋）的EcoRV、XbaⅠ双酶切位点之间，构建pcDNA3．1-3A4。分别以人基因组DNA和pGEM-CYP3A4质粒DNA为模板，扩增出CYP3A4启动子和CYP3A4内含子10全长（野生型和突变型）序列，插入到pcDNA3．1-3A4的MluⅠ、NheⅠ双酶切位点之间，取代原有的CMV启动子，构建pcDNA3．1-P3A4、pcDNA3．1-W3A4（野生型）和pcDNA3．1-M3A4（突变型）。将质粒转染入HepG2细胞，检测CYP3A4 mRNA表达水平。结果：构建的重组质粒经酶切验证与测序鉴定，插入片段的序列和方向与预期完全一致。与转染pcDNA3．1／Hygro（＋）的HepG2细胞比较，pcDNA3．1-P3A4、pcDNA3．1-W3A4、pcDNA3．1-M3A4转染组细胞CYP3A4 mRNA表达水平均提高（P＜0．05），但 pcDNA3．1-M3A4组表达水平低于 pcDNA3．1-P3A4和 pcDNA3．1-W3A4组（P ＜0．05）。结论：成功构建了CYP3A4*1G依赖的CYP3A4内含子10启动的真核表达载体；CYP3A4内含子10能够启动CYP3A4基因的表达，且存在CYP3A4*1G等位基因依赖性。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张莉蓉	郑州大学基础医学院药理学教研室	89	388	11.0	15.0
2	杨卫红	郑州大学基础医学院法医学教研室	32	59	4.0	5.0
3	张卫	郑州大学第一附属医院麻醉科	279	1658	19.0	26.0
4	曾昭书	郑州大学基础医学院法医学教研室	26	35	3.0	4.0
5	王沛	郑州大学药学院药理学系	63	291	8.0	15.0
6	赵云龙	郑州大学基础医学院法医学教研室	14	51	3.0	7.0
7	闫良	郑州大学基础医学院药理学教研室	5	13	3.0	3.0
8	魏璐嫚	郑州大学基础医学院药理学教研室	1	1	1.0	1.0