人源NOVA1蛋白的真核表达及其抗低氧活性鉴定

• 作者: 吕贝 孔玲 朱素娟 李华玲 陈欣虹
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 人源NOVA1蛋白 真核表达载体 转染 分布 抗低氧
• 年，卷（期）: 2016,（4）
• 所属期刊栏目: 生物技术与方法
• 页码范围: 507-517
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.150345

摘要

构建人NOVA1基因的真核表达载体pCMV-Myc-NOVA1,转染PC12细胞后筛选最佳转染条件,进而结合细胞免疫组织化学研究NOVA1蛋白在PC12细胞中的表达分布,并探究其抗低氧活性.根据NCBI数据库NOVA1基因序列设计上下游引物,以pCR4-TOPO-NOVA1载体为模板采用聚合酶链式反应扩增获得NOVA1基因的全长cDNA编码序列,限制性内切酶SalⅠ和XhoⅠ双酶切后插入pCMV-Myc真核表达载体,酶切及直接测序验证后采用脂质体转染法转染入PC12细胞,针对转染比例和转染时间进行优化,进而采用实时定量PCR和Western blotting检测NOVA1蛋白的表达,最后采用细胞免疫组织化学检测NOVA1蛋白在PC12细胞中的表达定位及其抗低氧活性.通过酶切和直接测序验证,成功构建了真核表达载体pCMV-Myc-NO VA1;质粒和Lip02000最佳转染比例为1:2.5,最佳转染时间为72 h;最佳转染条件下NOVA1基因和蛋白的表达水平显著增加,转染pCMV-Myc-NOVA1质粒后,NOVA1蛋白主要分布于细胞核和细胞质;过表达NOVA1的PC12细胞增殖活性明显增加.本文采用分子克隆的方法成功构建了NOVA1基因的真核表达载体,通过条件优化实现了高效表达并测定过表达NOVA1蛋白具有明显的抗低氧活性,不仅为深入揭示NOVA1蛋白的作用机理提供了重要参考,而且为NOVA1蛋白潜在的药物开发提供了重要技术支撑.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孔玲	扬州大学医学院生物化学教研室	10	3	1.0	1.0
2	陈欣虹	扬州大学医学院生物化学教研室	12	28	4.0	5.0
3	朱素娟	扬州大学生技学院生物化学教研室	6	50	4.0	6.0
4	李华玲	扬州大学医学院生物化学教研室	25	33	4.0	4.0
5	吕贝	扬州大学医学院生物化学教研室	2	1	1.0	1.0