Flag和GFP双标记的SK2通道表达质粒的构建尧鉴定和序列分析

• 作者: 余奕言 曾晓荣 李涛 杨艳 范学慧 谭晓秋 黄文俊
• 来源期刊: 泸州医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: 小电导钙激活钾通道 重叠PCR 基因工程
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 527-530
• 页数: 4页
• 分类号: R972.4
• 字数: 2484字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2669.2016.06.009

摘要

目的：：采用Overlapping PCR（重叠PCR）法进行人源SK2通道Flag和GFP融合表达质粒的构建，为下一步胞外运用Flag抗体进行SK2通道的转运调控研究奠定基础。方法：在既往克隆的人SK2通道基因的表达质粒pIRES-SK2的基础上，采用重叠PCR法构建Flag和GFP双标签标记的表达质粒pEGFP-N3-Flag-SK2（简写为Flag-SK2-GFP）。结果：构建的表达质粒Flag标签插入SK2通道的S1-S2胞外环区域，GFP标签连接SK2通道胞内的C末端，通过酶切、测序等证实质粒构建成功。结论：成功构建人心房肌SK2通道基因表达质粒Flag-SK2-GFP，为下一步研究SK2通道转运过程及调控机制奠定了基础。