hISO基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达及鉴定

• 作者: 刘星 周鹤峰 王新颖 王燕 葛正龙 邵敏
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 异麦芽糖酶 原核表达 α-葡萄糖苷酶 大肠杆菌
• 年，卷（期）: 2016,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 59-63
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3524字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20160112

摘要

目的:构建原核表达载体pET-28a(+)-hISO,探讨其融合蛋白在大肠杆菌中的稳定表达情况,为后续实验研究奠定基础.方法:以Caco-2细胞的总RNA为模版,采用RT-PCR方法扩增出大小为1 770 bp的人异麦芽糖酶(hISO)基因片段,将其插入到pET-28a(+)中,构建重组载体pET-28a(+)hISO.经PCR、酶切及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白,利用SDS-PAGE电泳、Western blotting对重组蛋白进行分析和鉴定.结果:经PCR、酶切及测序鉴定后,重组质粒pET-28a(+)-hISO构建正确,表达重组蛋白相对分子质量为68 860,将融合蛋白进行纯化,经40和60 mmol·L-1咪唑缓冲液洗脱后能够得到浓度和纯度相对较高的蛋白.结论:成功地构建了hISO基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得了融合蛋白表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周鹤峰	遵义医学院珠海校区生物化学教研室	31	130	6.0	10.0
2	邵敏	遵义医学院珠海校区生物化学教研室	31	107	6.0	9.0
3	葛正龙	遵义医学院生物化学教研室	78	273	9.0	11.0
4	王燕	遵义医学院珠海校区生物化学教研室	33	91	5.0	6.0
5	刘星	遵义医学院珠海校区生物化学教研室	13	24	3.0	4.0
6	王新颖	遵义医学院珠海校区生物化学教研室	5	16	3.0	4.0