针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体的构建及功能鉴定

• 作者: 刘柳 蔡莹 连博文 陈澄
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: shRNA Chmp1b Cre/LoxP 转基因载体,构建
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 968-972,976
• 页数: 6页
• 分类号: Q28
• 字数: 3602字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12007/j.issn.0258-4646.2016.11.003

摘要

目的 设计构建针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体,以用于制备相关转基因小鼠,并在体外验证其有效性.方法 剔除pcDNA3.1载体的CMV启动予以及多克隆位点,然后接入带有LacZ-fLoxP插入失活的小鼠U6启动子并引入适当的酶切位点,装入设计好的shRNA片段,测试shRNA抑制Chmp1b表达的效率与专一性,检查Cre重组酶介导位点特异性重组去除LoxP位点之间的lac基因后U6启动子活性恢复情况.结果 设计的shRNA片段可明显降低Chmp1b的表达,抑制效率达90％以上;成功构建针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体,插入U6启动子中的LacZ-fLoxP片段既可以控制U6启动子活性又可以起到报告基因的作用.结论 针对小鼠Chmp1b基因的可诱导shRNA表达转基因载体可以用于制备相关转基因小鼠.