乳液单引物PCR构建随机ssDNA文库方法的建立及优化

• 作者: 史新惠 崔蕾蕾 邵可可 邵启祥 马达
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 乳液PCR 乳液单引物PCR 适配子 指数富集配体进化技术 随机ssDNA文库
• 年，卷（期）: 2016,（11）
• 所属期刊栏目: 临床检验技术研究
• 页码范围: 823-826
• 页数: 4页
• 分类号: Q503
• 字数: 3649字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13602/j.cnki.jcls.2016.11.07

摘要

目的 建立并优化乳液单引物PCR扩增法,高效构建高质量随机ssDNA文库,以提高从随机文库中筛选适配子的几率.方法 构建长90 bp(含52 bp随机序列)寡核苷酸文库,用乳液PCR转换成dsDNA文库,再以dsDNA文库为模板,分别用乳液单引物PCR和常规单引物PCR扩增制备ssDNA文库,并对二者进行比较.通过改变模板、聚合酶、dNTP和引物浓度优化乳液单引物PCR反应条件.结果 乳液PCR能高效扩增出dsDNA文库且无副产物;常规单引物PCR构建ssDNA文库时,15个循环时即有大量副产物产生,且与产物条带混合一起无法分离;而乳液单引物PCR从15 ～35个循环均无副产物生成,且产物量多于常规单引物PCR.在优化乳液单引物PCR时,模板浓度对产物量影响最大,引物浓度对副产物的量影响最大.结论 乳液单引物PCR能显著提高产物量并控制副产物的量,可提高指数富集配体进化(SELEX)技术筛选效率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邵启祥	江苏大学医学院	78	336	9.0	14.0
2	马达	盐城市第一人民医院检验科	19	63	5.0	7.0
3	史新惠	盐城市第一人民医院检验科	4	6	1.0	2.0
4	崔蕾蕾	盐城市第一人民医院检验科	7	5	1.0	1.0
5	邵可可	江苏大学医学院	5	5	1.0	2.0