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ABCC2基因过表达细胞株的建立及鉴定
ABCC2基因过表达细胞株的建立及鉴定
作者:
张洪
张英
彭锐
魏丹芸
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
ABCC2 基因
过表达
慢病毒载体
HEK293 细胞
摘要:
目的:构建携带 ABCC2基因的慢病毒载体,转染 HEK293细胞,筛选出稳定过表达 ABCC2基因的细胞株并进行鉴定,为体外实验确定与多药耐药相关蛋白2(MRP2)外排转运相关的底物药物及其转运机制提供细胞模型。方法根据 GenBank提供的 ABCC2基因 cDNA 序列设计引物,PCR 扩增该基因并将其连接至慢病毒载体 PZE -LV105,包装病毒并感染 HEK293细胞。用嘌呤霉素进行筛选得到过表达 ABCC2基因的稳转细胞株,通过基因测序、实时荧光定量 PCR(RTQ -PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)对稳转细胞进行鉴定。结果测序结果证明重组慢病毒过表达载体所携带的 ABCC2基因序列与 Gen-Bank 提供的 ABCC2序列一致;RTQ -PCR 分析结果显示转染了 ABCC2基因的 HEK293细胞中 MRP2的 mRNA 相对表达比正常 HEK293细胞和空白载体对照 HEK293细胞高出约320倍;蛋白免疫印迹试验显示,转染了 ABCC2基因的 HEK293细胞中MRP2蛋白表达水平比正常 HEK293细胞和空白载体对照 HEK293细胞高出约150倍。结论该实验成功构建了稳定过表达ABCC2基因的细胞株,该细胞株可用于初步筛选确定 MRP2的特异性外排转运底物及其转运机制。
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文献信息
篇名
ABCC2基因过表达细胞株的建立及鉴定
来源期刊
安徽医药
学科
关键词
ABCC2 基因
过表达
慢病毒载体
HEK293 细胞
年,卷(期)
2016,(3)
所属期刊栏目
药学研究
研究方向
页码范围
433-436
页数
4页
分类号
字数
4008字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1009-6469.2016.03.007
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
张洪
武汉大学人民医院药学部
182
1002
16.0
21.0
2
张英
武汉大学人民医院药学部
38
223
8.0
14.0
3
魏丹芸
武汉大学人民医院药学部
11
26
2.0
4.0
4
彭锐
武汉大学人民医院药学部
38
99
5.0
7.0
传播情况
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参考文献(3)
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2013(1)
参考文献(1)
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2014(1)
参考文献(1)
二级参考文献(0)
2015(2)
参考文献(2)
二级参考文献(0)
2016(0)
参考文献(0)
二级参考文献(0)
引证文献(0)
二级引证文献(0)
研究主题发展历程
节点文献
ABCC2 基因
过表达
慢病毒载体
HEK293 细胞
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
安徽医药
主办单位:
安徽省药学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1009-6469
CN:
34-1229/R
开本:
大16开
出版地:
合肥市包河区乌鲁木齐路15号 安徽省食品药品检验研究院内食品药品检测技术大楼六楼
邮发代号:
26-175
创刊时间:
1997
语种:
chi
出版文献量(篇)
13671
总下载数(次)
19
总被引数(次)
82982
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