海水中副溶血弧菌的可视化LAMP快速检测方法

• 作者: 丁东生 张旭志 张艳 曲克明 杨倩倩 谷阳光 赵俊 黄梦诗
• 来源期刊: 中国渔业质量与标准
• 学科: 农学
• 关键词: 副溶血弧菌 海水 LAMP 免DNA提取 快速检测
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 检验与检测
• 页码范围: 58-65
• 页数: 8页
• 分类号: S917.1
• 字数: 4486字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-1833.2017.06.009

摘要

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是沿海地区常见的食源性致病菌之一,评估其在海洋环境中的存在状况对渔业生产与环境监测具有重要意义,但传统方法操作复杂或者设备繁重,往往不适合于现场快速检测.本实验采用环介导等温基因扩增法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),以tlh基因作为其标识基因,建立了海水中该菌的可视化快速检测方法.采用过滤法收集海水中的细菌,以细菌悬液为扩增模板,直接加入LAMP反应液中(免DNA提取与纯化步骤),以羟基萘酚蓝(hydroxynaphthol blue,HNB)为扩增结果指示剂,通过肉眼观察LAMP反应液颜色变化判断阴性、阳性结果.优化条件下,该方法反应约1h可获得的最低检测限为167 CFU/mL.较之于传统PCR方法,所建立的方法分析周期短(从开始预处理样品到得出检测结果只需～2 h);灵敏度高(-10×PCR).在验证实验中,应用该方法对青岛近岸海水中副溶血弧菌的检测,所获结果与经典培养方法和PCR方法结果一致.结果表明:该方法使用仪器简单,响应快,操作简易,可为现场快检海水中副溶血弧菌提供技术支持.