表达羊口疮病毒B2L基因重组腺病毒的构建及鉴定

• 作者: 俞赵荣 崔佣楸 徐前明 李永东 杨侃侃 潘飞 王元红 王勇 苏莉 蒋书东 钟灵毓
• 来源期刊: 扬州大学学报（农业与生命科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 羊口疮病毒 B2L基因 重组腺病毒 构建 鉴定
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65+9.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16872/j.cnki.1671-4652.2017.03.002

摘要

为构建表达羊口疮病毒(ORFV)B2L基因的重组腺病毒,提取实验室保存的ORFV AH-F10临床分离株的病毒核酸,PCR扩增B2L基因,将其克隆至穿梭载体中,再将重组穿梭质粒pHBAd-ORFV-B2L与骨架载体质粒pHBAd-BHGlox△E1利用脂质体共转染HEK293细胞,转染后48 h收获包装成功的重组腺病毒rAd-ORFV-B2L,对rAd-ORFV-B2L进行病毒滴度测定及遗传稳定性鉴定.结果表明:构建获得的重组腺病毒rAd-ORFV-B2L病毒滴度达到1079TCID50·μL-1.Western-blot检测结果表明rAd-ORFV-B2L在体外能够表达B2L蛋白,且能够与ORFV多抗血清发生特异性反应.RT-PCR检测结果表明,连续传代的rAd-ORFV-B2L能够稳定表达外源蛋白B2L.该研究为后续腺病毒疫苗的动物保护试验奠定基础.