含EMC6基因重组真核表达载体的构建及其在人肝L-02细胞中的异位表达

• 作者: Syed Hameed Ali Shah 何大伟 何敖林 李莎莎 王炳芳
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 内质网膜蛋白复合体亚基-6 重组质粒 载体构建 转染 L-02细胞
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 466-469
• 页数: 4页
• 分类号: R575.5
• 字数: 2818字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y170203

摘要

目的:构建pcDNA3.1(+)/EMC6真核表达载体,并将其在人肝L-02细胞株中过表达.方法:查询PubMed上EMC6的基因序列,针对该序列设计引物,提取L-02细胞的总RNA、聚合酶链式反应(PCR)扩增目的片段,采用基因重组技术将EMC6的cDNA定向插入真核表达载体pcDNA3.1中,构建pcDNA3.1(+)/EMC6真核表达载体,经菌落PCR,测序验证构建的准确性.应用脂质体转染方法将重组载体转入L-02细胞中,RT-PCR、蛋白质印迹法检测EMC6基因的mRNA和蛋白表达水平.结果:PCR和基因测序结果均表明pcDNA3.1(+)/EMC6重组质粒构建成功,RT-PCR和蛋白质印迹检测结果证实EMC6在人肝L-02细胞中过表达.结论:成功构建人pcD-NA3.1(+)/EMC6重组质粒,并在L-02细胞中过表达.