大肠杆菌表达的RNA解螺旋酶Ded1p的提纯与解螺旋机制

• 作者: 刘斐 单衍可 孙海凤 徐明飞 施志玉 谢青云 赵富林 雷静
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 单分子荧光共振能量转移 DExH/D-box家族 Ded1p蛋白 荧光标记RNA 局部双链打开
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 874-880
• 页数: 7页
• 分类号: S852.23
• 字数: 4647字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/inau.201604027

摘要

[目的]表达、提纯DExH/D-box家族蛋白Ded1p,并综合传统电泳以及单分子荧光共振能量转移(smFRET)技术,探究Ded1p的双链RNA解螺旋机制.[方法]原核表达、纯化出全长的Ded1p作为研究蛋白,并验证其解螺旋酶活性.以荧光对标记的带有3'末端单链RNA尾巴的13 bp双链RNA作为研究底物,基于全内反射的单分子荧光共振能量转移技术,在自制的样品通道内添加800 nmol·L-1 Ded1p、2 mmol·L-1 ATP/Mg2+以及研究底物进行解螺旋试验,再用自编的Matlab程序采集和分析数据,进而从单分子层面探究Ded1p的双链RNA解螺旋机制.[结果]首次通过Ni-NTA凝胶亲和层析与Capto-DEAE凝胶阴离子交换层析两步纯化手段,得到了大量纯净的、并且具有双链RNA解螺旋酶活性的Ded1p.Ded1p的smFRET试验在单分子层面实现了对Ded1p打开13 bp双链RNA过程的实时观察.通过分析FRET的变化过程,首次提出Ded1p主要以一步解螺旋的方式打开双链RNA结构.[结论]原核表达、纯化的Ded1p具有RNA解螺旋酶活性;该Ded1p是以局部双链打开的模式解开RNA双链.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	施志玉	南京农业大学动物医学院	5	33	3.0	5.0
2	赵富林	南京农业大学动物医学院	1	1	1.0	1.0
3	徐明飞	南京农业大学动物医学院	1	1	1.0	1.0
4	谢青云	南京农业大学动物医学院	1	1	1.0	1.0
5	单衍可	南京农业大学动物医学院	1	1	1.0	1.0
6	雷静	南京农业大学动物医学院	2	21	1.0	2.0
7	孙海凤	南京农业大学动物医学院	4	4	1.0	2.0
8	刘斐	南京农业大学动物医学院	2	21	1.0	2.0