G Ⅱ.17型诺如病毒多克隆抗体的制备及应用

• 作者: 丁力 万鑫 凌同 孟胜利 王文辉 王泽鋆 申硕 霍玉奇
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: G Ⅱ.17型诺如病毒 病毒样颗粒 多克隆抗体 HBGA-G Ⅱ.17 NoV VLPs阻断试验
• 年，卷（期）: 2017,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-7
• 页数: 7页
• 分类号: R373.2
• 字数: 5414字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2017.02.001

摘要

目的 制备兔抗G Ⅱ.17型诺如病毒(G Ⅱ.17 norovirus,G Ⅱ.17 NoV)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)多克隆抗体(兔抗G Ⅱ.17 NoV VLPs多克隆抗体),用其建立组织血型抗原(histo-blood group antigen,HBGA)-G Ⅱ.17 NoV VLPs阻断试验,并对其进行初步应用.方法 制备并纯化G Ⅱ.17 NoV VLPs,采用SDS-PAGE、电镜观察和粒径检测方法对其进行鉴定.将其免疫家兔制备兔抗G Ⅱ.17 NoV VLPs多克隆抗体,经Western blot对其进行鉴定,并用ELISA检测其效价及特异性.筛选与G Ⅱ.17 NoV VLPs结合力强的唾液HBGA受体类型,优化G Ⅱ.17NoV VLPs质量浓度及多克隆抗体稀释度,用兔抗G Ⅱ.17 NoV VLPs多克隆抗体建立HBGA-G Ⅱ.17 NoV VLPs阻断试验,并进行特异性验证及初步应用.结果 G Ⅱ.17 NoV VLPs经检测纯度为95％,且颗粒形态完整,粒径均一.制备的多克隆抗体在Western blot可见特异性条带,效价可达1∶25 600 000,并对其他基因型(G Ⅰ.2、G Ⅰ.7、G Ⅱ.3、G Ⅱ.4、G Ⅱ.7) VLPs的交叉反应较弱.G Ⅱ.17 NoV VLPs和A、B、0和AB 4种血型的唾液HBGA均能结合,差异无统计学意义(P＞0.05);以G Ⅱ.17 NoV VLPs质量浓度为0.25 μg/mL,多克隆抗体的稀释度为1∶160 000建立了HBGA-G Ⅱ.17 NoV VLPs阻断试验,并应用该方法对不同剂量G Ⅱ.17 NoV VLPs免疫的小鼠血清进行了半数阻断滴度检测.结论 成功制备了高效价兔抗G Ⅱ.17 NoV VLPs多克隆抗体,建立了HBGA-G Ⅱ.17NoV VLPs阻断试验,且该方法特异性良好,可用于G Ⅱ.17 NoV VLPs免疫效果的评价.