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越南水稻黄矮病毒多克隆血清抗体的制备
越南水稻黄矮病毒多克隆血清抗体的制备
作者:
何越强
吕荣华
杜新勇
覃武
阮德辉
陈氏懦花
陈阮河
韦善富
原文服务方:
南方农业学报
水稻黄矮病毒
多克隆抗体
酶联免疫吸附测定(ELISA)
N蛋白
表达
病毒纯化
摘要:
[目的]制备用于检测水稻黄矮病毒(RYSV)的多克隆抗体,为水稻和黑尾叶蝉上的病毒诊断提供技术支持.[方法]利用两种不同来源的RYSV抗原免疫家兔,一种是从受感染的水稻病叶组织纯化获得RYSV病毒粒子;另一种是从越南RYSV分离株克隆出完整N蛋白编码基因,然后将其连接至pET-28a载体上,在大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株中进行诱导表达获得N蛋白抗原.其中,N蛋白抗原又以两种形式(洗脱纯化N蛋白和N蛋白条带聚丙烯酰胺切片匀浆)对家兔进行免疫.最后,采用PTA-ELISA分析评估家兔抗体血清(多克隆抗体)对水稻叶片和黑尾叶蝉RYSV的特异性和敏感性.[结果]分离自越南RYSV分离株的N基因由1542个核苷酸组成,与来自我国和日本RYS分离株N基因序列进行比对,其核苷酸序列同源性分别为98.1%和97.9%,对应的推导氨基酸序列同源性为83.4%和99.4%.以RYSV病毒粒子、洗脱纯化N蛋白和N蛋白条带聚丙烯酰胺切片匀浆3种抗原免疫家兔获得的多克隆抗体均能有效检测出水稻植株中的RYSV,其中,感病植株的OD405分别为1.449、2.337和1.649,健康植株的OD405分别为0.375、0.294和0.283.PTA-ELISA检测结果表明,获得的多克隆抗体能从单个带病毒黑尾叶蝉中检测出RYSV,且该结论在RT-PCR检测中得到进一步验证.[结论]制备获得的多克隆抗体对RYSV具有较高特异性和敏感性,可用于水稻和黑尾叶蝉上的病毒诊断,同时表明以含有病毒植物蛋白的聚丙烯酰胺切片直接注射免疫模型动物制备多克隆抗体具有可行性.
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文献信息
篇名
越南水稻黄矮病毒多克隆血清抗体的制备
来源期刊
南方农业学报
学科
关键词
水稻黄矮病毒
多克隆抗体
酶联免疫吸附测定(ELISA)
N蛋白
表达
病毒纯化
年,卷(期)
2019,(7)
所属期刊栏目
植物保护·农业气象
研究方向
页码范围
1472-1482
页数
11页
分类号
S435.111.49
字数
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.2095-1191.2019.07.10
五维指标
传播情况
被引次数趋势
(/次)
(/年)
版权信息
全文
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引文网络
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水稻黄矮病毒
多克隆抗体
酶联免疫吸附测定(ELISA)
N蛋白
表达
病毒纯化
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
南方农业学报
主办单位:
广西壮族自治区农业科学院
出版周期:
月刊
ISSN:
2095-1191
CN:
45-1381/S
开本:
大16开
出版地:
邮发代号:
创刊时间:
1964-01-01
语种:
chi
出版文献量(篇)
7026
总下载数(次)
0
总被引数(次)
43586
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