海栖热袍菌磷酸戊糖变位酶基因克隆表达及发酵条件优化

• 作者: 孙芳芳 张兴群 梅旭旭 陈婷
• 来源期刊: 食品与药品
• 学科: 生物学
• 关键词: 海栖热袍菌 磷酸戊糖变位酶 重组大肠杆菌 发酵优化
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 229-234
• 页数: 6页
• 分类号: Q558+.4|Q786
• 字数: 3544字
• 语种: 中文

摘要

目的 从嗜热微生物海栖热袍菌中克隆磷酸戊糖变位酶基因,实现其在大肠杆菌中的表达.方法 以海栖热袍菌基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增获得编码磷酸戊糖变位酶蛋白基因(ppm),连接到具有T7强启动子的pET-32a质粒中,构建重组工程菌E.coli BL 21(DE3){pET-32a-Tmppm}.通过Plackett-Burman设计、最陡爬坡试验和Box-Behnken试验方法优化工程菌发酵条件,构建回归方程.结果 双酶切鉴定、测序分析和十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证实海栖热袍菌磷酸戊糖变位酶基因可在工程菌中表达.最佳发酵条件为诱导种龄0.6,诱导温度22.5℃,诱导时间13 h,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度0.45 mmol/L,培养基初始pH 7.6,接种量2.25％.结论 发酵条件优化后磷酸戊糖变位酶表达量大幅提高.实验结果为该酶的性质研究和应用提供了支撑.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈婷	东华大学化学化工与生物工程学院	41	135	7.0	10.0