MGB探针标记-实时荧光PCR方法检测细菌int1基因和ISCR1元件方法的建立

• 作者: 卢金星 李娟 赵晓菲 车洁 陈霞
• 来源期刊: 疾病监测
• 学科: 生物学
• 关键词: ISCR1复合型Ⅰ型整合子 int1基因 ISCR1元件 实时荧光PCR MGB探针
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 878-882
• 页数: 5页
• 分类号: Q503
• 语种: 中文
• DOI: 10.3784/j.issn.1003-9961.2017.10/11.022

摘要

目的 建立一种快速、准确检测细菌中ISCR1复合型Ⅰ型整合子的MGB探针二重实时荧光PCR方法.方法 根据ISCR1复合型Ⅰ型整合子中int1基因和ISCR1元件序列设计特异性引物和探针,在多种经常携带有2种多耐药相关基因元件的细菌中检测其特异性;使用含有2种基因元件特异性序列的重组质粒标准品评价建立方法的灵敏度.结果 建立的MGB二重探针实时荧光PCR检测方法特异性好,携带2种基因元件或单独含有ISCR1或者int1的实验菌株均出现相应特异性扩增曲线,对2种基因元件均不含的菌株进行试验扩增时,均未见出现特异性扩增曲线.对2种基因元件都存在的实验菌株的扩增中,亦不存在由于2套引物/探针相互影响而造成的干扰扩增.根据标准质粒样品构建的标准曲线可确定其对int1基因和ISCR1元件的检测灵敏度分别为5.89×101拷贝/μl和4.13×101拷贝/μl.结论 本研究成功建立了MGB二重探针实时荧光PCR快速检测方法.