HSA-TP5融合基因表达载体的构建及其真核表达

• 作者: 佟海滨 刘杨 孙新 安晓婷 张立岩 李坦 满枋霖 田丹 申野 颜伟群
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 胸腺五肽 人血清白蛋白 融合基因 基因表达
• 年，卷（期）: 2017,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 948-952,后插5
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 3061字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13481/j.1671-587x.20170517

摘要

目的:构建人血清白蛋白(HSA)-胸腺五肽(TP5)融合蛋白表达载体,并在毕赤酵母中表达,阐明其生物学活性.方法:利用基因重组技术构建HSA-TP5融合基因,并转染至毕赤酵母中从而构建其真核表达体系,通过琼脂糖凝胶电泳分离及试剂盒纯化获得PPICZαC-HSA-TP5真核重组表达质粒;采用两步发酵法对HSA-TP5基因工程菌进行高密度发酵,对发酵液上清蛋白沉淀浓缩,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法、阳离子交换层析及疏水层析等方法分离纯化蛋白;采用MTT法检测该融合蛋白促淋巴细胞增殖活性.结果:PCR法获得HSA目的基因片段长度为1 845 bp.酶切鉴定融合质粒HSA-TP5-pPICZαC得到片段长度为707 bp.测序分析,目的基因HSA和TP5序列与GenBank公布的基因序列完全一致,并正向连接融合.PCR法鉴定PPICZαC-HSA-TP5真核重组质粒与酵母基因组DNA整合,与对照组比较,转化组出现基因片段长度为1 860 bp.SDS-PAGE分析,在甲醇诱导后72 h内,随着诱导时间延长,HSA-TP5融合蛋白表达量逐步升高.利用阳离子交换层析及AKTA多功能蛋白纯化系统纯化得到HSA-TP5融合蛋白.MTT法检测,HSA-TP5融合蛋白与TP5蛋白具有一致的促淋巴细胞增殖活性.结论:通过构建HSA-TP5毕赤酵母真核表达体系可获得HSA-TP5融合蛋白并具有生物学活性.