猪DDX21基因的克隆、序列分析及原核表达

• 作者: 孙紫德 安康 方六荣 谢立兰 陈力
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 DDX21基因 克隆 序列分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2017,（3）
• 页码范围: 42-47
• 页数: 6页
• 分类号: Q78|S828
• 字数: 4700字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7668/hbnxb.2017.03.007

摘要

DEAD-box解旋酶21(DExD-box helicase 21, DDX21)是含DEAD-box的RNA解旋酶家族成员之一,不仅参与RNA的合成和加工过程,同时还参与机体的天然免疫应答,调控病毒的复制.为了研究猪DDX21基因的结构和功能,以猪肾传代细胞(PK-15)总cDNA为模板,根据GenBank 公布的预测序列(XM_005657387.2)设计引物扩增猪源DDX21基因,并采用分子生物学软件将其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析.结果显示,首次成功克隆了猪DDX21基因的cDNA序列(GenBank登录号为KX396051),其开放读码框全长为2 355 bp,编码784个氨基酸;与牛、斑马鱼、人、小鼠、大鼠和非洲爪蟾的氨基酸序列同源性分别为91.7%,57.5%,88.0%,82.3%,83.8%和48.9%;该基因编码的蛋白结构域和人、牛、小鼠、大鼠一样,其C端都具有保守的GUCT结构域;系统进化树分析表明猪DDX21与牛DDX21的亲缘关系最近.进一步构建原核表达质粒pET28a-DDX21,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),对DDX21基因进行原核表达.经 SDS-PAGE 分析显示重组菌可表达分子量约为 90 kDa的融合蛋白,与预期相符;在IPTG诱导浓度一定的条件下,重组菌的最佳诱导时间为5 h.猪DDX21基因的克隆和原核表达,为进一步研究DDX21蛋白的结构和生物学功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谢立兰	武汉生物工程学院应用生物技术研究中心	7	23	3.0	4.0
5	安康	河北北方学院医学检验学院	3	9	2.0	3.0
6	陈力	武汉生物工程学院应用生物技术研究中心	1	5	1.0	1.0
10	孙紫德	武汉生物工程学院应用生物技术研究中心	1	5	1.0	1.0