菌丝霉素MP1106融合蛋白的复性及纯化方法

• 作者: 张文宇 王鹏举 苏文成 谭焕波 邹培建
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 抗菌肽 菌丝霉素 蛋白融合 复性 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 94-100
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0287

摘要

旨在建立高效、快捷的菌丝霉素衍生物MP1106大肠杆菌表达系统.通过基因融合的方式构建生物表面活性剂-菌丝霉素衍生物(DAMP4-MP1106)融合蛋白表达载体,在大肠杆菌中进行表达;并对目的蛋白MP1106进行分离纯化和分子内二硫键鉴定.结果显示,融合蛋白DAMP4-MP1106在大肠杆菌中以包涵体的形式成功表达,表达产物在变性条件下经Ni2+-NTA亲和层析纯化;经检测分析,摇瓶中DAMP4-MP1106的发酵产量为118 mg/L,纯度为94.7%;采用96孔板筛选并建立复性方法,获得水溶性融合蛋白DAMP4-MP1106;并经TEV蛋白酶酶切以及二次Ni2+-NTA亲和层析纯化,可获得纯度为99%的抗菌肽MP110618 mg/L,回收率达到了38.4%.通过简捷方法快速鉴定分子内的二硫键,初步证实了抗菌肽MP1106完成了分子内结构正确折叠.建立了高效快捷的菌丝霉素大肠杆菌表达系统.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王鹏举	中国科学院天津工业生物技术研究所工业酶国家工程实验室	2	1	1.0	1.0
2	谭焕波	中国科学院天津工业生物技术研究所工业酶国家工程实验室	3	9	2.0	3.0
3	苏文成	中国科学院天津工业生物技术研究所工业酶国家工程实验室	1	1	1.0	1.0
4	张文宇	中国科学院天津工业生物技术研究所工业酶国家工程实验室	1	1	1.0	1.0
5	邹培建	中国科学院天津工业生物技术研究所工业酶国家工程实验室	3	7	1.0	2.0