骆驼抗G250蛋白胞外区纳米抗体的制备及鉴定

• 作者: 余志平 朱通 李周全 江军 王洛夫 胡明 范校周 郭燕丽
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 纳米抗体 肾癌相关抗原G250 噬菌体展示 骆驼
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 541-547
• 页数: 7页
• 分类号: R392-33|R32.11
• 语种: 中文
• DOI: 10.16016/j.1000-5404.201611198

摘要

目的 制备能与肾癌相关抗原G250胞外区特异性结合的纳米抗体.方法 通过瞬时转染方式将包含G250蛋白胞外区基因片段的质粒导入到真核细胞HEK 293F中表达G250胞外区,以该重组蛋白免疫新疆双峰驼,构建噬菌体展示纳米抗体库.通过体外定向筛选,得到能与G250蛋白胞外区特异性结合的噬菌体,以Monoclonal phage ELISA方法筛选出具有结合活性的噬菌体克隆.通过细胞ELISA和流式细胞仪再次验证淘选到的纳米抗体的细胞结合活性.结果 测序证明编码G250的重组DNA片段序列正确,Western blot检测结果证实G250重组蛋白成功表达.通过免疫新疆双峰驼,成功构建了库容为2.87×109的噬菌体展示骆驼VHH免疫文库.在体外对免疫纳米抗体库进行3轮固相筛选,使具有结合活性的噬菌体克隆得到了有效富集,阳性率高达54.3％.经过抗原ELISA、细胞ELISA鉴定,筛选出3个具有细胞结合活性的纳米抗体噬菌体克隆,取其中结合活性最高的Nb-G5进行表达、纯化,产量为1.5 mg/L培养物,流式细胞仪检测结果证实Nb-G5与G250表达阳性的细胞具有很强的特异性结合能力.结论 从纳米抗体库中淘选得到了在分子和细胞水平均能与G250蛋白胞外区特异性结合的纳米抗体.