两种L-天冬氨酸α-脱羧酶的表达与酶学性质分析

• 作者: 丁重阳 张梁 李由然 石贵阳 陈夏林 顾正华
• 来源期刊: 微生物学通报
• 关键词: L-天冬氨酸α-脱羧酶 β-丙氨酸 单核增生李斯特菌 杰氏棒杆菌 酶学性质
• 年，卷（期）: 2017,（10）
• 所属期刊栏目: 基因克隆及功能研究
• 页码范围: 2337-2344
• 页数: 8页
• 字数: 4517字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13344/j.microbiol.china.170009

摘要

[目的]实现单核增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)和杰氏棒杆菌(Corynebacterium jeikeium) L-天冬氨酸α-脱羧酶基因在Escherichia coli中异源表达,纯化重组蛋白并对其进行酶学性质分析.[方法]依照E.coli的密码子偏好性优化来源于L.monocytotogens和C.eikeium的panD基因序列.人工合成后以此构建表达载体p ET28a(+)-panDLm和pET28a(+)-panDCj,转化E.coli BL21(DE3),实现panDLm和panDC.j基因的异源表达.利用亲和层析纯化获得携带组氨酸标签的纯酶后进行酶学性质研究,并考察底物对酶反应的影响.[结果]重组菌蛋白电泳分析结果表明,重组酶PanDL.m和PanDC.j均有自加工功能,裂解后形成了α亚基和β亚基.重组酶比酶活分别为8.9 U/mg和11.8 U/mg.两种酶的最适反应温度均为60℃,最适pH分别为7.0和6.0,它们都在30-50℃,酸性条件下较稳定.与目前研究最多的谷氨酸棒杆菌(Corynebacteriumglutamicum)来源的PanDC.g相比,PanDL.m受底物天冬氨酸的抑制作用较小.[结论]PanDL.m和PanDCj可在高温酸性条件下特异性转化L-天冬氨酸生成β-丙氨酸,其中PanDL.m受底物的抑制作用较小,具有一定的工业应用潜力.